|
|
| Présentation / Technique / Services / Projets | Espace |
Génétique Expérimentale
Présentation
Le laboratoire de Génétique Expérimentale (G.E.), est un plateau technique dont la mission essentielle est la création sur demande de souris génétiquement modifiées. Ce laboratoire répond aux besoins des équipes de recherche de la Génopole.
La localisation :
Le laboratoire dépend de l’Institut Pasteur de Lille (IPL) et se situe sur le site, dans le bâtiment Jean LEVY au 2éme étage.
L’organisation :
L’ensemble du laboratoire est organisé en quatre secteurs: la culture cellulaire, la microinjection, la biologie moléculaire, l’animalerie.
Chaque secteur est sous la responsabilité d’une personne qui assure son fonctionnement. L’ensembles des activités sont coordonnées pour permettre des microinjections tous les jours de la semaine, du lundi au vendredi et selon un planning établi avec les demandeurs.
Le comité de pilotage :
Un Comité de pilotage a été mis en place pour assurer un bon fonctionnement du service: répartition des moyens entre les différents programmes scientifiques, étude des investissements et des problèmes liés à l’activité. Ce comité est composé de chercheurs :
Claude AURIAULT (IBL/CNRS), Yvan de Launoit (IBL/CNRS), David Dombrowicz (IPL/INSERM), Hafid MEZDOUR (IPL), Bart STAELS (IPL/Lille 2).
Les personnes :
Hafid MEZDOUR, responsable scientifique - tel : 03 20 87 79 74 – fax : 03 20 87 79 06
mail: hafid.mezdour@pasteur-lille.fr
Anne-Marie AYRAL, attaché de recherche IPL – tel : 03 20 87 79 78
mail: anne-marie.ayral@pasteur-lille.fr
Cinq techniciens IPL :
Joëlle WAREIN, culture cellulaire – tel : 03 20 87 77 51
mail: joelle.warein@pasteur-lille.fr
Marie-pierre FOURMAUX, biologie moléculaire – tel 03 20 87 79 78
mail: marie-pierre.fourmaux@pasteur-lille.fr
Laurent POUILLY, micomanipulations – tel : 03 20 87 77 51
mail: laurent.pouilly@pasteur-lille.fr
Philippe PERSOONS, micromanipulations – tel : 03 20 87 79 78
mail: philippe.persoons@pasteur-lille.fr
Isabelle RIVA, animalerie – tel : 03 20 87 77 51
mail: isabelle.riva@pasteur-lille.fr
Technique
La culture cellulaire :
La salle est équipée de deux hottes type PSM et deux incubateurs réservés à la culture de cellule ES, et divers matériels (électroporateur, cryoconservateurs, etc.). Cette salle permet de mener plusieurs projets simultanément.
La biologie moléculaire :
Un espace laboratoire pour 8 personnes est disponible pour le travail de biologie moléculaire et d’expérimentation. L’équipement comprend le matériel nécessaire pour effectuer des constructions et les criblages (southern blot et PCR).
Les micromanipulations :
Une salle équipée de 2 postes complets de microinjection (ADN et cellules ES). Cette salle comporte également divers matériels pour la manipulation d’embryons (stéréoscope, microscope, incubateur, étireuse, microforge, micromeule, etc.).
L’animalerie :
Un espace de 36 m2 dans l’animalerie centrale partagé en 2 zones: Un petit laboratoire équipé pour assurer les réimplantations d’embryons et les changes de cages; Une zone d’une capacité d’hébergement de 2000 souris.
Services
La transgénèse :
La création des souris transgéniques par injection de l’ADN dans le pronucléus d’ovocytes s’effectue selon une technique désormais bien standardisée. Brièvement, des ovocytes sont prélevés sur des souris femelles préalablement superovulées et fécondées. Ces ovocytes sont microinjectés avec l’ADN fourni par le laboratoire demandeur et réimplantés dans l’oviducte de souris pseudo-gestante. La gestation dure 19-21 jours. Deux semaines après la naissance des souris, des bouts de queues sont prélevés pour le génotypage. Seuls les animaux ayant intégré le transgène dans leur génome sont sélectionnés comme fondateurs potentiels.
La trangénèse ciblée par recombinaison homologue :
La technologie de recombinaison homologue dans les cellules ES (en anglais gène targeting) est le fruit de remarquables progrès dans les connaissances en biologie moléculaire, en biologie des cellules pluripotentes (ES: stem cell) et en embryologie. Contrairement à la technique de transgénèse classique qui ne permet que des intégrations aléatoires dans le génome hôte, la recombinaison homologue permet des modifications très précises et variées (gain de fonction, perte de fonction, substitution, etc.) des gènes cibles.
Brièvement, la première étape consiste à construire le vecteur qui permettra d’induire la mutation par recombinaison homologue dans des cellules ES. La seconde étape consiste à introduire le vecteur dans les cellules ES par électroporation in-vitro puis à procéder à la sélection et l’identification des clones correctement modifiés.
La troisième étape du projet consiste à injecter les cellules ES correctement modifiées dans des blastocystes que l’on réimplante ensuite dans des souris pseudogestantes. On visualise la participation des cellules mutées grâce au taux de chimérisme. Les souris chimères sont accouplées avec des souris C57Bl/6 pour des mutants hétérozygotes puis homozygotes.
Projets et Résultats
| thématique | # projets | stade d'avancement |
|---|---|---|
| immunologie | 2 Knock-out | en cours de réalisation : plusieurs clones ES |
| artériosclérose | 1 Knock-out | réalisé |
| 2 Knock-out | 1 réalisé et 1 en cours | |
| maladie multifactorielle | 2 Knock-in et 2 flux | en cours de réalisation : plusieurs clones ES |
| obésité | 1 Knock-out | en cours de réalisation |
| oncologie | 1 flux | en cours de réalisation |