Cancer - Laboratoires du réseau lillois de cancérologie

• Laboratoire d'Oncologie Moléculaire Humaine - Centre Oscar Lambret
• Laboratoire de Physiologie Cellulaire - Unité INSERM EPI 9938-UPRES 1030
• Unité CNRS UMR 8525 - IPL
• Unité INSERM 524
• Equipe d'accueil EA 2692 ICPAL
• unité CNRS EP560
• unité INSERM 459
• Laboratoire de Biologie du Développement, UPRES EA 1033
• Unité INSERM 377
• Unité de Glycobiologie Structurale et Fonctionnelle CNRS-UMR 8576
• CNRS - UMR 8526 Mécanismes du Développement de la Cancérisation
• Laboratoire de Pharmacologie Antitumorale - équipe Christian Bailly
• UMR 8527 CNRS/Lille II/IPL

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Laboratoire de transfert des concepts et outils de la recherche fondamentale à l’application clinique. Cancers du sein.

- Groupe d’étude des facteurs biologiques prédictifs

(Dr F. Révillion) : p53, uPA, erbB2, récepteurs de type I

- Groupe d’étude des facteurs biologiques de contrôle épigénétique

 (Pr M. Hebbar) : sélectine, sialyl-transférases, leptine, angiogenèse

- Groupe d’étude des facteurs biologiques de prédisposition et de dépistage des cancers

(Dr J.-Ph. Peyrat) : BRCAs, instabilité génétique

II Collaborations

- Génopole lilloise : Analyse protéomique (Pr H. Hondermarck), analyse génomique (Dr J-P Kerckaert)

- Laboratoire de Biologie du Développement USTL (Pr H. Hondermarck)

- Laboratoire de Chime biologique USTL (Pr Ph. Delannoy)

- Laboratoire d’hématologie CHRU Lille, INSERM 524 (Dr Preudhomme, Pr Fenaux, Dr Kerckaert)

- Unité d’Endocrinologie Moléculaire, INRA Jouy-en-Josas ( Dr J. Djiane)

- Département d’Oncogénétique CAC Marseille (Dr H. Sobol) : BRCA

- Industries (Sangtec Medical, Stockholm ; Oncogene Science, New York ; Biotech pour l’analyse transcriptomique)

- European Organization for Research and Treatment of Cancer (Prs T. Benraad, Dr J. Foekens, Pays-Bas ; Pr G. Daxenbichler, Autriche)

- Groupement Interrégional de Recherche en Cancérologie (Lille, Reims, Nancy, Dijon, Strasbourg)

- Widschwendter M, Widschwendter A, Welte T, Daxenbichler G, Zeimet AG, Bergant A, Berger J, Peyrat JP. Retinoic acid modulates prolactin receptor expression and prolactin-induced STAT-5 activation in breast cancer cells in vitro. Br J Cancer 1999, 79(2), 204-210.

- Eisinger F, Noguès C, Guinebretiére JM, Peyrat JP, Bardou VJ, Noguchi T, Vennin P, Sauvan R, Lidereau R, Brinbaum D, Jacquemier J, Sobol H. Novel indications for BRCA1 screening using individual clinical and morphological features. Int J Cancer 1999, 84, 263-267.

- Jaquemier J, Eisinger F, Noguès C, Sun Zz, Guinebretiere JM, Peyrat JP, Geneix J, Lidereau R, Birnbaum D, Sobol H. Histological type and syncitial growth pattern affect E-cadherin expression in a multifactorial analysis of a combined panel of sporadic and BRCA1-associated breast cancers. Int J Cancer 1999, 83, 45-49.

- Preudhomme C, Revillion F, Merlat A, Hornez L, Duflos-Grardel N, Jouet J. P., Cosson A, Peyrat J.P., Fenaux P. Detection of BCR-ABL transcripts in chronic myeloid leukemia (CML) using a " real time " quantitative RT-PCR assay. Leukemia 1999, 13, 957-964.

- Hebbar M, Revillion F, Louchez MM, Bonneterre J, Peyrat JP. Prognostic value of circulating soluble E-selectin in node-negative breast cancer patients. Clin Cancer Res 1999, 5: 1427-1433.

- Laud K., Gourdou I., Belair L., Peyrat J.P, Djiane J. Caracterization of a prolactin receptor isoform in normal and tumoral human breast tissues. Int. J. Cancer, 2000, 85 : 771-776.

- Pawlowski V., Revillion F., Hornez L., Peyrat JP. A real-time one-step RT-PCR method to quantify c-erbB-2 gene expression in human breast cancer. Cancer Det Prev, 2000, in press

- Hebbar M., Peyrat JP, Hornez L, Hatron P-Y, Hachulla E, Devulder D. Increased concentrations of circulating endostatin in patients with systemic sclerosis. Arthritis Rheum , 2000, in press.

- Hebbar M., Peyrat J.P. Selectin in breast cancer. Int J. Biol. Markers, 2000, in press.

- Peyrat JP, Recchi MA, Hebbar M, Pawlowski V, Hornez L, Le Bourhis X, Hondermarck H, Harduin-Lepers A, Delannoy P. Regulation of sialyltransferase expression by estradiol and 4-OH-tamoxifen in the human breast cancer MCF7. Mol Cell Biol Res Comm, 2000, in press.

• Revillion F, Pawlowski V, Hornez L, Peyrat JP. GAPDH expression in human breast cancer in relation to cell proliferation. Eur J Cancer 2000, in press.

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Les hyperplasies bénignes et les cancers de la prostate sont des maladies des plus fréquentes et le cancer de la prostate est la seconde cause de mortalité par cancer en France.

Malgré les différentes approches thérapeutiques (hormonales ou non) qui permettent de réduire considérablement les taux d’androgènes, l'efficacité des traitements sur la prolifération reste médiocre. Ainsi, les androgènes ne sont certainement pas seuls responsables de la tumorigénèse de la prostate mais d’autres facteurs sont impliqués.

Notre projet consiste en l'étude du rôle des neuropeptides du Ca2+ intravellulaire et des canaux ioniques dans les processus de la prolifération, d'apoptose et de cancérogénèse de la prostate.

Nous utilisons à cette fin les approches électrophysiologiques pour l’étude des canaux ioniques (patch-clamp), cytochimiques pour l’étude de la localisation des récepteurs et de la sécrétion des neuropeptides et de l'imagerie calcique pour de l’homéostasie calcique.

Ces études pourraient avoir des conséquences très importantes dans le domaine de la Santé Publique et notamment dans le développement de l’hormonothérapie des cancers et des hypertrophies bénignes de la prostate.

- Skryma R., Van Coppenolle F., Dufy-Barbe L., Dufy B., Prevarskaya N. (1999).

Characterization of Ca²⁺-inhibited Potassium Channels in Excised Patches of Cells from the Human Prostate Cancer Cell Line LNCaP.

Receptors and Channels. 6 : 241-253.

- Ouadid-Ahidouch H., Van Coppenolle F., Le Bourhis X., Belhaj A., Prevarskaya N. (1999).

Potassium channels in rat prostate epithelial cells.

Febs Letters. 459(1) : 15-21.

- Van Coppenolle F., Le Bourhis X., Carpentier F., Delaby G., Cousse H., Raynaud J.P., Dupouy J.P., Prevarskaya N. (2000)

Pharmacological effect of the lipido-sterolic extract of serenoa repens (permixon) on rat prostate hyperplasia induced by hyperprolactinemia. comparison with finasteride.

The Prostate. 43 / 49-58

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Eric Buisine, Sophie Girault, Régis Millet, Jean Dessolinn, Christophe Biot, Sandrine Delarue, Adina Ryckebusch, Nicolas Willand, Marie-Ange Debreu, Pascal Lemière, Hervé Drobecq, Valéry Landry

Compétences :

Conception et synthèse d’inhibiteurs d’enzymes

L’approche cancer du groupe est basée sur l’inhibition de cibles enzymatiques appartenant soit à la famille des flavoenzymes disulfure réductases, soit à la famille des protèine kinases C.

Disulfure réductases :

la surexpression du système thiorédoxine réductase (TrxR)/thiorédoxine (Trx) a été démontrée dans de nombreuses lignées tumorales. La Trx est une protéine rédox, de faible poids moléculaire, trouvée dans les cellules procaryotes et eucaryotes. Les deux résidus cystéines du motif CGPC du site actif de la Trx humaine (hTrx) subissent une étape réversible d'oxydo-réduction catalysée par une flavoprotéine NADPH-dépendante, la thiorédoxine réductase (hTrxR). La Trx est elle-même capable de réduire la ribonucléotide réductase qui catalyse la première étape de synthèse de l'ADN. La Trx exerce aussi un contrôle rédox sur un certain nombre de facteurs de transcription.

Nous avons conçu et synthétisé des substrats alternatifs de la TrxR libérant un chromophore au cours de la réduction du pont disulfure, et robotisé ce test colorimétrique mesurant l'activité enzymatique hTrxR, pour sélectionner des inhibiteurs potentiels de l'enzyme.

Les onze isoformes caractérisés sont classées en trois groupes : calcium et phospholipides dépendant alpha, béta I, béta II, gamma, calcium et phospholipides indépendant delta, epsilon, hepta m, calcium et phospholipides indépendant lambda, theta, zeta. Il s’agit d’enzymes régulatrices majeures impliquées dans une grande variété de mécanismes physiologiques dont la croissance et la multiplication cellulaire. Pour aboutir à des inhibiteurs spécifiques des différentes isoformes, nous avons choisi de synthétiser la région pseudosubstrat N-terminale de chaque isoforme, se refermant sur le site actif de l’enzyme en l’absence de ses activateurs. Le problème de la pénétration cellulaire de ces peptides pseudosubstrats a été résolu en les modifiant par un reste hydrophobe. Leur distribution intracellulaire a été déterminée et corrélée à l’induction sélective d’apoptose sur cellules Jurkat et HL 60 humaines.

- E. Davioud-Charvet et coll. Analytical Chemistry, 1999, 268, 1-8.

• K. Thiam et coll. FEBS Letters, 1999, 459, 285-290.

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E-mail : jpk@lille.inserm.fr

OBjectifS

L’objectif général de l'Unité est l’étude des gènes et des mécanismes de l’oncogenèse des hémopathies malignes, étude qui débouche vers la recherche de nouvelles approches thérapeutiques. Il consiste principalement à caractériser (i) les anomalies moléculaires, (ii) la structure et l’expression et (iii) les propriétés et le rôle physiopathologique, des gènes - oncogènes ou gènes suppresseurs de tumeur - impliqués dans les hémopathies malignes. Il vise également, grâce à l’identification de nouvelles anomalies génétiques récurrentes, à l’amélioration du diagnostic, du pronostic ou de la surveillance de la "maladie résiduelle". Il s’agit enfin sur ces bases moléculaires, d’une part, de mieux comprendre les modes d'action de certains médicaments antitumoraux dans le traitement et aussi dans l’induction d’hémopathies malignes et, d’autre part, de concevoir et expérimenter de nouvelle approches de thérapie génique, notamment l'immunothérapie par transfert de gènes.

Les différents projets de recherche de l’Unité rassemblent trois équipes interdépendantes et complémentaires:

• Cytogénétique moléculaire des hémopathies malignes. (Responsable : Claude Preudhomme)

Ce projet s'appuie sur le développement de nouveaux outils (FISH, FISH-Multiplex, CGH, CGH microarrays...) pour 1°) identifier de nouveaux gènes impliqués dans la leucémogenèse 2°) étudier la valeur pronostique de l'implication de ces gènes dans les hémopathies malignes (ex: le gène AML1, pour lequel nous venons de décrire un nouveau mécanisme d’inactivation) 3°) rechercher des corrélations avec les réponses thérapeutiques et, 4°) permettre le suivi de la maladie résiduelle.

• Structures et fonctions des gènes impliqués dans les anomalies chromosomiques récurrentes. (Responsable : Sylvie Zouitina-Galiègue).

Le projet vise la caractérisation moléculaire des anomalies génétiques récurrentes dans les hémopathies malignes, avec 1°) l’étude de la structure, l’expression, la fonction et la conversion oncogénique des gènes RhoH/TTF, L-Plastine, partenaires de LAZ3 dans les réarrangements chromosomiques en 3q27 et 2°) la recherche des gènes cibles du répresseur transcriptionnel LAZ3

• Analyse de la structure et de l'expression du génome des Hémopathies Malignes sur puces à ADN. (Responsable : Jean-Pierre Kerckaert).

Ce projet a pour objectif la fabrication et l'utilisation de puces à cDNA permettant l'analyse par Hybridation Génomique Comparative (HGC-Biopuces ou "CGH-microarrays") et la mise en évidence de nouvelles altérations génomiques et de nouveaux marqueurs diagnostiques et pronostiques.

2 - Reconnaissance moléculaire oncogène - médicament anticancéreux - topoisomérase. Pharmacologie Antitumorale. (Responsable : Christian Bailly).

Les différents projets de l'équipe visent à mieux connaître les phénomènes de reconnaissance moléculaire entre des petites molécules et les acides nucléiques, ainsi que leurs conséquences biologiques pour 1°) la conception et le développement rationnel de nouveaux ligands spécifiques de l'ADN et 2°) améliorer leur potentiel thérapeutique. Les composés étudiés sont principalement des agents intercalants ainsi que des ligands du petit sillon de l'ADN. L'équipe cherche également à élucider les phénomènes d'apoptose induite par les agents antitumoraux, essentiellement des inhibiteurs de topoisomérases, à partir de différentes lignées cellulaire (sensibles ou chimio-résistantes).

• Elaboration de vecteurs viraux pour le transfert de gènes dans les cellules hématopoïétiques. (Responsable : Jean-Claude D'Halluin)

Dans ce projet l’équipe profite de son expérience dans le domaine de la virologie des adénovirus pour 1°) effectuer une étude de l’interaction entre les adénovirus et les cellules hématopoïétiques, 2°) développer des vecteurs spécifiques de ces cellules.

• Immunothérapie des leucémies aiguës myéloïdes par transfert de gènes. (Responsable : Bruno Quesnel).

Ce projet vise 1°) la mise au point de systèmes de vectorisation de gènes dans les cellules leucémiques en cultures primaires et 2°) l’étude de l’intérêt du transfert de différents gènes (par exemple GM-CSF et B7.1) à visée d’immunostimulation dans des leucémies murines syngéniques.

- Preudhomme C, Roumier C, Hildebrand MP, Dallery-Prudhomme E, Lantoine D, Laï JL, Daudignon A, Adenis C, Bauters F, Fenaux P, Kerckaert JP,Galiegue-Zouitina S: Nonrandom 4p13 rearrangements of the RhoH/TTF gene, encoding a GTP-binding protein, in non-Hodgkin's lymphoma and multiple myeloma. Oncogene, 2000, 19:2023-32.

- Galiegue-Zouitina S, Quief S, Hildebrand MP, Denis C, Detourmignies L, Lai JL, Kerckaert JP: Nonrandom fusion of L-plastin(LCP1) and LAZ3(BCL6) genes by t(3;13)(q27;q14) chromosome translocation in two cases of B-cell non-Hodgkin lymphoma. Genes Chromosomes Cancer 1999, 26:97-105.

- Bailly C, Dassonneville L, Colson P, Houssier C, Fukasawa K, Nishimura S, Yoshinari T: Intercalation into DNA is not required for inhibition of topoisomerase I by indolocarbazole antitumor agents.Cancer Res. 1999, 59, 2853-2860.

- Bailly C, Lansiaux A, Dassonneville L, Demarquay D, Lavergne O, Bigg DCH: Homocamptothecin, an E-ring modified camptothecin analog, generates new topoisomerase I-mediated DNA breaks. Biochemistry 1999, 38, 15556-15563.

- David-Cordonnier MH, Hamdane M, Bailly C, D'halluin JC: The DNA binding domain of the human c-Abl tyrosine kinase preferentially binds to DNA sequences containing an AAC motif and to distorted DNA structures. Biochemistry 1998 37:6065-76.

- Gonzalez R, Vereecque R, Wickham TJ, Vanrumbeke M, Kovesdi I, Bauters F, Fenaux P, Quesnel B : Increased gene transfer in acute myeloid leukemic cells by an adenovirus vector containing a modified fiber protein. Gene Ther 1999,6: 314-20.

- Gonzalez R, Vereecque R, Wickham Jj, Facon T, Hetuin D, Kovesdi I, Bauters F, Fenaux P, Quesnel B: Transduction of bone marrow cells by the AdZ.F(pK7) modified adenovirus demonstrates preferential gene transfer in myeloma cells. Hum Gene Ther, 1999, 10:2709-17.

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Tél. : 03 20 96 43 74 ; Fax 03 20 96 43 61 ; E-mail. henicha@phare.univ-lille2.fr

Les récents développements en biologie moléculaire et en génétique ont conduit à l’identification de nouvelles cibles pour la thérapie des cancers. En particulier, certains systèmes enzymatiques intervenant dans la transduction des signaux mitogènes ou dans certaines fonctions chromatiniennes pourraient être inhibés sélectivement dans le cas de division cellulaire anarchique.

• Inhibition de la prolifération et induction de l'apoptose par des inhibiteurs de topoisomérase I :

Il a été montré qu'un inhibiteur de topoisomérase I, la -lapachone, était susceptible d'induire l'apoptose sur des lignées de leucémies promyélocytaires (HL 60) ou prostatiques (PC-3, DU-145, LNCaP) et très récemment, que d’autres inhibiteurs telles, la camptothécine, dont un dérivé est actuellement utilisé en clinique dans le cas du cancer du côlon et la rebeccamycine possédaient les mêmes propriétés. Nous avons vérifié ces données sur le modèle HL-60 en suivant l'apoptose par l'étude de la fragmentation d'ADN (électrophorèse, effet TUNEL en microscopie de fluorescence... ; Anal. Pharmacol., 1999 - Eur. J. Pharmacol., 2000) et avons établi un programme, actuellement en cours, consistant à synthétiser des dérivés de la camptothécine possédant dans leurs structures les éléments permettant une meilleure distribution tissulaire (chaînes dialkylaminoalkyle, substituant polyéthylèneglycol), un ciblage moléculaire (chaîne pseudopeptidique permettant une liaison spécifique sur des séquences clés de l'ADN) ou un ciblage cellulaire (chaînes peptidiques permettant une liaison forte sur les récepteurs de la bombésine qui s'expriment dans les cellules PC-3 et DU-145 ou une liaison spécifique sur les récepteurs du VIP qui s'expriment dans les cellules LNCaP). La possibilité de tels ciblages s'appuie sur notre bonne connaissance des interactions pseudopeptide-ADN-topoisomérase (Biochemistry, 1994 33, 9865 - 1994, 33, 15348 - 1996, 35, 4251 ; Mol. Pharmacol. 1996, 49, 343 - 1997, 51, 448 ; Anti Cancer Drug Des., 1995, 10, 131 - 1995, 10, 155 - 1997, 12, 481 ; Bioconjugate Chem., 1994, 5, 475) et des antagonistes peptidiques du VIP et du PACAP (Regul. Peptides 1994 52, 119 ; Peptide Res. 1996 9, 322 ; Biochem. Biophys. Res. Commun., 1994, 205, 1617).

• Inhibition d’étapes-clés dans les voies de transduction de facteurs de croissance :

Les recherches menées au sein du laboratoire ont essentiellement permis de mettre au point les modèles d’étude et les " outils chimiques " concernant :

i) l'inhibition de l'activité tyrosine-kinase du récepteur de l'EGF (et la modulation de la voie de transduction du récepteur par les voies de transduction de récepteurs couplés aux protéines G) (Anti-Cancer Drug Design, 1998 ; J. Heterocyclic Chem., 1997)

ii) l'inhibition de la farnésylation de la protéine p 21 Ras (Pharm. Pharmacol. Commun., 1999 ; J. Med. Chem. 2000, soumise)

3. l'inhibition de l’expression et de l’activité de métalloprotéases matricielles (publication commune avec A. Bollen, U.L. Bruxelles, soumise)

Ils nous servent actuellement pour avancer dans la connaissance des mécanismes de progression du cancer de la prostate et aborder des moyens de régulation de cette évolution grâce, en particulier, à la composante " Drug Design " de notre équipe.

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Tél : 03 20 87 10 90 ; Fax : 03 20 87 11 11 ; E-mail : bernard.vandenbunder@ibl.fr

Nous étudions les réseaux de régulation transcriptionnelle et les perturbations qui les affectent dans le cadre des pathologies cancéreuses. Voici un aperçu des résultats récents.

Thème 1 : Etude fonctionnelle du facteur de transcription c-Rel pendant l'apoptose et la prolifération cellulaire, Corinne ABBADIE (03 20 87 10 90)

Nous avons montré que l’expression du facteur de transcription c-Rel est associée à l’apoptose (Abbadie et al. 1993, Cell, 75, 899-912), à la prolifération ou à la différenciation selon les tissus dans l’embryon de poulet. La surexpression de c-Rel bloque la prolifération des cellules HeLa, induit leur apoptose et les protège contre l'apoptose induite par le TNF. Tous ces effets sont associés à l'induction par c-Rel de l'expression du gène codant la manganèse superoxyde dismutase (Mn SOD). Plusieurs résultats suggèrent que les effets de c-Rel sont médiés par la concentration d'H₂O₂ et des radicaux O₂^.-, qui est contrôlée par la MnSOD dans les cellules HeLa.

Thème 2 : Etude fonctionnelle de Ets1 et des membres de sa famille au cours de l'embryogenèse et de l'angiogenèse, Fabrice SONCIN (03 20 87 11 20) et Bernard VANDENBUNDER (03 20 87 10 90)

Nous avons montré que l’expression de Ets1 corrèle avec le déroulement de processus invasifs, et en particulier de l’angiogenèse dans l’embryon et dans des tumeurs. Nous avons développé des vecteurs rétroviraux qui nous ont permis d’exprimer des protéines Ets1 normales ou mutantes dans des cellules endothéliales (Mattot et al. 2000 Oncogene, 19, 762-772). Cette approche nous a permis d'identifier un nouveau gène cible de Ets1, le gène codant pour la VE-cadherine, marqueur précoce et spécifique des cellules endothéliales (Lelièvre et al., Oncogene, in press). Ces outils rétroviraux ont été utilisés dans des modèles murins d’angiogenèse que nous avons développés. Ainsi l'infection par le rétrovirus codant pour le domaine de fixation à l'ADN de Ets1 inhibe le développement angiogénique induit par le FGF-2 dans l'oreille de souris.

Thème 3 : Signalisation et morphogenèse épithéliale,

Véronique FAFEUR (03 20 87 10 91) et Bernard VANDENBUNDER

La dispersion et la morphogenèse sont deux réponses biologiques induites par le SF/HGF, par l’intermédiaire de son récepteur MET dans les cellules épithéliales. Nous étudions les relations entre les cascades de kinases déclenchées par le SF/HGF, l’activation transcriptionnelle de Ets1 et les réponses biologiques induites par ce facteur. Nous avons montré que la réponse transcriptionnelle au SF/HGF, mesurée avec un fragment de promoteur contenant des sites de fixation pour les protéines Ets et pour les protéines AP1, implique une induction rapide de la kinase Erk et une répression de la kinase Jnk. Les modifications d'activité de ces deux kinases sont indispensables pour l'induction des réponses de morphogenèse et de dispersion par le SF/HGF. Nous avons montré que la mutation des quatre résidus tyrosines de la partie intracellulaire de MET n'empêche pas l’action de ce récepteur sur la cascade RAS (Tulasne et al., 1999, Mol. Biol. Cell, 10, 551-565). Cette nouvelle voie de signalisation RAS-dépendante conduit à l’activation d’un signal de dispersion, et non plus de morphogenèse.

Nous avons montré qu'il est possible de mesurer dans des cellules vivantes l'activité transcriptionnelle de fragments de promoteurs contenant des sites de fixation pour des protéines Ets. Nous avons développé des algorithmes qui permettent de quantifier en même temps le mouvement d'une cellule et l'activité transcriptionnelle à l'intérieur de cette cellule (Maire et al., 2000, Anal. Biochem, 280, 118-127).

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Email : formstecher@lille.inserm.fr

Secrétariat : Michèle REVEZ : Tél. : 03.20.62.69.52 ; Fax. : 03.20.62.68.84 ; Email : u459@lille.inserm.fr

L’unité 459 INSERM a été créée le 1^er janvier 1997, succédant au CJF 9203 " Pharmacologie moléculaire et cellulaire des rétinoïdes ".

L’objectif général de l’Unité est l’étude du mécanisme d’action et du rôle de certains récepteurs nucléaires dans la différenciation cellulaire et l’apoptose. Concrètement sont étudiés les récepteurs de l’acide rétinoïque et des glucocorticoïdes, ainsi qu’un récepteur nucléaire orphelin, le récepteur HNF-4. Les travaux sur les récepteurs de l’acide rétinoïque et des glucocorticoïdes, dont le ligand naturel est connu, et pour lesquels de nombreux ligands de synthèse ont été décrits, s’attachent à élucider les modalités propres de l’interaction de ces ligands de synthèse avec leurs récepteurs et de leurs actions biologiques dans diverses cibles cellulaires, principalement humaines. L’intérêt de ce thème réside dans l’importance des glucocorticoïdes et des rétinoïdes en thérapeutique, notamment dans les domaines du cancer et des affectations dermatologiques. Les travaux sur le récepteur orphelin HNF-4 concerne l’élucidation de son mécanisme d’action et de son rôle biologique dans le pancréas normal et au cours du diabète.

Les différents projets de l’Unité se développent au sein de trois équipes complémentaires et interactives.

Cette équipe s’intéresse aux mécanismes fondamentaux par lesquels les rétinoïdes de synthèse régulent l’expression des gènes. Elle a montré que les rétinoïdes de synthèse interagissent de manière différente avec les récepteurs de l’acide rétinoïque, en fonction de leur structure propre, et sont ainsi capables de favoriser différentes conformations de ces récepteurs. Ces différences conformationnelles ont des conséquences fonctionnelles sur le plan de la capacité à reconnaître certaines séquences ADN cibles (éléments de réponse), à recruter des coactivateurs transcriptionnels et à induire la transcription des gènes. L’équipe s’intéresse également au mécanisme encore très mystérieux de l’activité anti-AP-1 des rétinoïdes et rôle des phénomènes de phosphorylation et du " cross-talk " avec les autres voies de signalisation intracellulaire dans le mécanisme d’action des rétinoïdes. Enfin, elle s’intéresse également aux interactions hsp90-récepteur des glucocorticoïdes.

L’équipe étudie les effets des rétinoïdes (P. Marchetti) et des glucocorticoïdes (T. Idziorek) de synthèse dans divers modèles cellulaires, dont celui de la peau, (abordé au niveau des équivalents de peau en culture, des cellules immortalisées HaCat et de lignées tumorales). Elle cherche à décrypter le rôle des différents récepteurs de l’acide rétinoïque dans les réponses observées, en utilisant des ligands des sous-classes de récepteurs. Elle a récemment montré qu’un rétinoïde de synthèse atypique induisait une apoptose massive et rapide des cellules tumorales via un mécanisme non transcriptionnel impliquant la mitochondrie. Elle s’intéresse aussi aux effets des rétinoïdes et glucocorticoïdes à effets dissociés anti-AP-1. Elle dispose de tous les outils de l’étude fine de l’apoptose et se lance dans l’approche protéomique (D. Belaïche) pour l’étude des phénomènes cellulaires rapides (phosphorylation) induits par les molécules testées. Au sein du groupe, PM. Danzé développe les techniques d’étude de l’expression différentielle des gènes sous l’effet des ligands étudiés

Cette équipe a cloné HNF-4 humain, entamé une étude de l’activité transcriptionnelle de ses différentes isoformes, et surtout contribué depuis deux ans à l’étude des conséquences fonctionnelles des mutations de HNF-4 observées au cours du diabète de type MODY. Elle a ainsi montré que certaines mutations identifiées par l’épidémiologie génétique étaient de simples polymophismes, alors que d’autres entraînaient une diminution plus ou moins sévère d’activité transcriptionnelle, pouvant contribuer à la physiopathologie du diabète. Elle a montré également que l’impact fonctionnel de ces mutations dépend du contexte cellulaire, et s’attache maintenant à préciser le rôle de HNF-4 et les effets de ses mutations dans des cellules pancréatiques murines et humaines (collaboration avec le groupe de F. Pattou dans le laboratoire de J. Lefebvre).

4 - Enfin, les compétences de l’équipe biologique dans le domaine de l’apoptose ont conduit au développement d’un thème transversal au sein de l’IFR 22 : l’étude du rôle de l’apoptose au cours du choc septique. Un projet associant les équipes de C. Chopin, l’Unité Inserm 422 de JC. Beauvillain et l’U 459 est coordonné par P. Marchetti (U459). Il a été montré que l’apoptose et les caspases sont impliqués dans la défaillance cardiovasculaire au cours de choc septique in vivo chez le rat.

- Mailfait S, Belaiche D, Kouach M, Dallery N, Chavatte P, Formstecher P, Sablonniere B.

Critical role of tyrosine 277 in the ligand-binding and transactivating properties of retinoic acid receptor alpha.

Biochemistry. 2000 Mar 7;39(9):2183-92.

- Marchetti P, Zamzami N, Joseph B, Schraen-Maschke S, Mereau-Richard C, Costantini P, Metivier D, Susin SA, KroemerG, Formstecher P.

The novel retinoid 6-[3-(1-adamantyl)-4-hydroxyphenyl]-2-naphtalene carboxylic acid can trigger apoptosis through a mitochondrial pathway independent of the nucleus.

Cancer Res. 1999 Dec 15;59(24):6257-66.

- Delmotte MH, Tahayato A, Formstecher P, Lefebvre P.

Serine 157, a retinoic acid receptor alpha residue phosphorylated by protein kinase C in vitro, is involved in RXR.RARalpha heterodimerization and transcriptional activity.

J Biol Chem. 1999 Dec 31;274(53):38225-31.

- Lefebvre O, Wouters D, Mereau-Richard C, Facon T, Zandecki M, Formstecher P, Belin MT.

Induction of apoptosis by all-trans retinoic acid in the human myeloma cell line RPMI 8226 and negative regulation of some of its typical morphological features by dexamethasone.

Cell Death Differ. 1999 May;6(5):433-44.

- Suaud L, Hemimou Y, Formstecher P, Laine B.

Functional study of the E276Q mutant hepatocyte nuclear factor-4alpha found in type 1 maturity-onset diabetes of the young: impaired synergy with chicken ovalbumin upstream promoter transcription factor II on the hepatocyte nuclear factor-1 promoter.

Diabetes. 1999 May;48(5):1162-7.

- Suaud L, Formstecher P, Laine B

The activity of the activation function 2 of the human hepatocyte nuclear factor 4 (HNF-4alpha) is differently modulated by F domains from various origins.

Biochem J. 1999 May 15;340 ( Pt 1):161-9.

- Mouchon A, Delmotte MH, Formstecher P, Lefebvre P.

Allosteric regulation of the discriminative responsiveness of retinoic acid receptor to natural and synthetic ligands by retinoid X receptor and DNA.

Mol Cell Biol. 1999 Apr;19(4):3073-85.

- Lefebvre B, Mouchon A, Formstecher P, Lefebvre P.

H11-H12 loop retinoic acid receptor mutants exhibit distinct trans-activating and trans-repressing activities in the presence of natural or synthetic retinoids.

Biochemistry. 1998 Jun 30;37(26):9240-9.

- Lefebvre P, Mouchon A, Lefebvre B, Formstecher P.

Binding of retinoic acid receptor heterodimers to DNA. A role for histones NH2 termini.

J Biol Chem. 1998 May 15;273(20):12288-95.

- Joseph B, Lefebvre O, Mereau-Richard C, Danze PM, Belin-Plancot MT, Formstecher P.

Evidence for the involvement of both retinoic acid receptor- and retinoic X receptor-dependent signaling pathways in the induction of tissue transglutaminase and apoptosis in the human myeloma cell line RPMI 8226.

Blood. 1998 Apr 1;91(7):2423-32.

- Dao-Phan HP, Formstecher P, Lefebvre P.

Disruption of the glucocorticoid receptor assembly with heat shock protein 90 by a peptidic antiglucocorticoid.

Mol Endocrinol. 1997 Jun;11(7):962-72.

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Thématiques principales de l’Unité : Contrôle de la croissance des cellules épithéliales mammaires normales ou cancéreuses (division cellulaire, différenciation, apoptose), migration normale ou pathologique et interactions cellules épithéliales-cellules stromales

Thèmes des équipes et responsables :

1) Contrôle de la croissance des cellules épithéliales mammaires par les facteurs de croissance ou des facteurs de différenciation (H.Hondermarck)

2) Morphogenèse et cancérogenèse de la glande mammaire (X. Desbiens)

3) H19 et glande mammaire (Jean-Jacques Curgy)

4) Régulation ionique et moléculaire de la division cellulaire (J.P. Vilain)

Enseignants-chercheurs 5 PR, 10 MCF

Personnels techniques

ITA 4,7 (2x100%, 2x50%, 1x90%, 1x80%)

Etudiants: 6 Thésards, 4 DEA

Ce groupe étudie les effets de facteurs tels que le FGF, le NGF, le TGFbeta, le butyrate de Na, les polyphénols ou encore le tamoxifène sur des cultures de cellules épithéliales de sein. Les effets sur la prolifération des cellules ou leur différenciation voire leur entrée en apoptose sont décrits. Ce groupe recherche des marqueurs caractéristiques de chaque type d’évolution et utilise à cette fin la technique d’électrophorèse bidimensionnelle. Les marqueurs de cancer font l’objet d’une attention particulière.

L’idée maîtresse qui domine notre recherche est que au moins certains membres de la famille ETS sont des facteurs de transcription pouvant réguler l’activité de gènes cibles appartenant à deux classes au rôle essentiel dans la migration des cellules: ceux codant pour des protéases et ceux codant pour des molécules d’adhérence cellule-cellule, cellule-matrice. Il a pu être montré l’importance des membres du groupe ETS dans les mécanismes d’induction embryonnaire et notamment dans les processus de morphogenèse de branchement. Il a aussi été montré qu’une surexpression de ces gènes dans des cellules cancéreuses mammaires conférait à ces cellules un fort pouvoir invasif. Nous avons entrepris de moduler l’expression de quelques gènes spécifiquement impliqués dans ces mécanismes. Les phénotypes obtenus et le pouvoir angiogénique des cellules ainsi modifiées sont étudiés.

Nous avons pu montrer que le gène H19 s’exprime fortement, par rapport à une situation normale, dans les cancers primaires du sein et une étude statistique sur 102 tumeurs indique que cette surexpression est significativement corrélée au status des recepteurs hormonaux et au facteur T de la classification TNM. Nous avons aussi démontré une régulation négative de l’expression du gène par la protéine p53 sauvage dans des cellules HeLa transfectées stablement par des versions sauvage ou mutante du gène d’intérêt.

Par ailleurs, l’expression du gène H19 est contrôlée positivement par le 17-beta-oestradiol et négativement par la progestérone dans l’utérus et dans la glande mammaire.

La transcription du gène H19 est activée dans les cellules épithéliales mammaires par leur ancrage et par une stimulation de l’essaimage de ces cellules.

De nombreuses molécules régulatrices du cycle cellulaire ( cyclines, cdk, inhibiteurs de cdk, anti-oncogènes...) ont été impliquées dans la cancérogenèse. Nos objectifs sont centrés sur la régulation des modifications post-traductionnelles liées aux évènements ioniques dans l'ovocyte de Xénope. Nous étudions à la fois la levée du blocage prophasique induite par des agents hormonaux ou mitogènes et la levée du blocage métaphasique induite par une augmentation de calcium intracellulaire. Ce modèle biologique est aussi un remarquable système d'expression qui nous permet d'analyser les voies de signalisation de différentes isoformes de récepteurs de facteurs de croissance après injection intra ovocytaire de clones ou d'extraits de cellules cancéreuses.

L'étude des évènements moléculaires, régulant la transition G2/M, nous permet de comprendre certains aspects de la prolifération cellulaire. La sortie de métaphase II est déclenchée par un signal calcique qui serait relayé par des phosphatases dont nous évaluons les effets en testant divers inhibiteurs. En outre des inhibiteurs de kinases sont capables de lever ce blocage. Une meilleure connaissance des mécanismes moléculaires de l'arrêt métaphasique pourrait permettre l'élaboration de mimétiques capables de bloquer la division cellulaire.

L'étude des interactions entre la signalisation ionique et moléculaire des facteurs de croissance et l'activité des canaux ioniques membranaires devrait permettre l'identification des effecteurs moléculaires susceptibles de coupler l'effet prolifératif des facteurs de croissance à l'activité des canaux ioniques.

- Descamps., Le Bourhis X., Delehedde M., Boilly B., Hondermarck H. (1998). Nerve growth factor is mitogenic for cancerous but not normal human breast epithelial cells. Journal of Biological Chemistry, 273, 16659-16662.

- Delannoy-Courdent A., Mattot V., Fafeur V., Fauquette W., Pollet I., Calmels T., Vercamer C., Boilly B., Vandenbunder B., Desbiens X. (1998). The expression of an Ets1 transcription factor lacking itsactivation domain decreases uPA proteolytic activity and cell motility, and impairs normal tubulogenesis and cancerous scattering in mammary epithelial cells. Journal of Cell Science, 11, 1521-1534.

- Adriaenssens E., Lottin S., Dugimont T., Fauquette W., Coll J., Dupouy J-P., Boilly B., Curgy J-J. (1999). Steroid hormones modulate H19 gene expression in both mammary gland and uterus. Oncogene, 18, 4460-4473.

• Bodart J-F., Bechard D., Bertout M., Gannon J., Rousseau A., Vilain J-P., Flament S. (1999). Activation of Xenopus eggs by the kinase inhibitor 6-DMAP suggests a differential regulation of Cyclin B and p39mos proteolysis. Experimental Cell Research, 253, 413-421.

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Dans le cas de la plupart des types cellulaires, la barrière physique que constitue la membrane plasmique est suffisante au maintien de l’intégrité cellulaire. Cependant, les épithéliums des tractus respiratoire, digestif et reproducteur ainsi que ceux de la surface oculaire, en contact direct avec l’environnement, requièrent une protection supplémentaire. Ils sont ainsi recouverts d’une sécrétion protectrice, servant également de barrière sélective. Cette sécrétion, appelée mucus, est produite par des cellules épithéliales spécialisées dans des fonctions de stockage et de sécrétion : les cellules caliciformes des épithéliums de surface et les cellules muqueuses des glandes sous-muqueuses. Le mucus est un gel fortement hydraté et les macromolécules responsables de ce gel sont les mucines.

Les gènes codant ces mucines ont été clonés et leur organisation génomique déterminée. Ils codent des ARN messagers de très grande taille (jusqu’à 24 Kb). L’objectif de notre recherche est donc d’étudier ces mucines du gène au produit final en étudiant le trafic intracellulaire et les différentes étapes de sa glycosylation.

Les cancers épithéliaux constituent un problème de santé publique non négligeable dans les pays à niveau de vie élevé où une relation étroite entre facteurs environnementaux, tabagisme et nutrition est maintenant démontrée. Au moins 75 % des tumeurs se développent aux dépens de cellules épithéliales qui sont spécialisées dans la fonction de sécrétion et notamment celle du mucus.

Les mucines sont le constituant O-glycoprotéique majeur du mucus et elles assurent des fonctions de protection et de défense des muqueuses. Actuellement, 10 gènes de mucines humaines ont été décrits : de MUC1 à MUC7 comprenant MUC5AC et MUC5B ainsi que MUC11 et MUC12).

Notre groupe a découvert MUC5AC, MUC5B et MUC4. Parmi les dix gènes, nous avons pu montrer que MUC6, MUC2, MUC5AC et MUC5B forment un " cluster " localisé sur le chromosome 11 en p15.5. Le profil d’expression de huit de ces gènes a été étudié en situation physiologique par hybridation in situ par notre laboratoire. Il s’avère que chaque tissu mucipare présente une combinatoire d’expression qui lui est propre et au sein d’un même tissu il existe une spécificité cellulaire d’expression. Cette spécificité est elle-même liée au fait que les mucines sont soit sécrétées (MUC2, 5AC, 5B, 6), soit membranaires (MUC1, 3, 4 et probablement MUC11 et 12).

Des anomalies qualitatives et quantitatives de l’expression des mucines ont été rapportées dans diverses situations pathologiques en particulier tumorales. Dans certains cas, ces anomalies pourraient être corrélées avec un mauvais pronostic (expression des mucines associée à l’invasivité des tumeurs).Il existe donc une grande complexité de la régulation de l’expression des gènes de mucines humaines. De plus, les données récentes de la recherche fondamentale ont permis d’appréhender de nouvelles fonctions pour ces molécules qui contiennent soit un module TGF- soit deux modules EGF. Ces fonctions de facteur de croissance potentiel étudiées au laboratoire ouvrent donc de nouveaux horizons quant au rôle de ces gènes dans la prolifération cellulaire, la différenciation et la promotion des métastases

• Etude de l’expression des gènes de mucines dans les cancers épithéliaux et de leur rôle dans la différenciation, l’embryogenèse et la réparation des épithéliums.

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Les recherches menées au sein de l’UMR 8576 (Directeur André VERBERT) concernent dans leur ensemble la Glycobiologie et s’intéressent à différents aspects de la structure, du métabolisme et des fonctions biologiques des molécules glucidiques libres et conjugués. Dans le domaine de la cancérologie, des recherches portent sur l’expression des glycosyltransférases dans les cellules malignes, sur la recherche de marqueurs glycoprotéiques de cancérisation notamment par une approche protéomique, sur la structure des antigènes glucidiques associés aux tumeurs, ainsi que sur le rôle particulier de la lactoferrine cytoplasmique dans le contrôle de la différenciation cellulaire.

Structure des antigènes glucidiques associés aux tumeurs (Jean-Claude Michalski)

- Le groupe ² Glycobiologie de la Communication Cellulaire" s’intéresse aux antigènes glucidiques associés aux tumeurs (TAA). Le but est de recenser les modifications structurales des glycannes des glycoconjugués de la surface cellulaire, afin de mieux comprendre les dérèglements enzymatiques (glycosidases ou glycosyltransférases) qui en sont responsables. Ces antigènes sont d’excellents marqueurs des différentes phases de la cancérisation et de la prolifération cellulaire. Ils peuvent également être utilisés comme cibles dans des stratégies d’immunothérapies cancéreuses. Nos travaux portent plus particulièrement sur l’étude de la glycosylation des mucines intestinales dans le cancer du côlon. Une autre série de travaux visent à élucider de nouvelles cibles anticancéreuses de nature glycoprotéinique par une approche protéomique différentielle à l’aide d’anticorps dirigés contre des épitopes glucidiques reconnus comme spécifiques aux tumeurs.

Expression des sialyltransférases dans les cellules malignes (Philippe Delannoy)

- Les modifications structurales associées au développement tumoral dépendent directement des changements d'expression des gènes des enzymes responsables de leur biosynthèse : les glycosyltransférases. Nous nous consacrons essentiellement à la famille des sialyltransférases par une approche pluridisciplinaire associant l’identification par clonage moléculaire des gènes de sialyltransferases, l’étude de leur spécificité et de leurs mécanismes de régulation, ainsi que l’analyse de leur expression dans les tumeurs. Nos objectifs sont, d’une part de déterminer le rôle joué par la sialylation dans la physiologie des cellules tumorales et dans le développement des tumeurs et d’autre part de déterminer la valeur pronostique de l’expression des sialyltransférases dans les tumeurs.

- La lactoferrine est synthétisée par les cellules épithéliales et les leucocytes soit sous la forme d’une glycoprotéine de sécrétion soit sous une forme cytoplasmique : la d -lactoferrine. La lactoferrine de sécrétion ralentit in vivo la croissance des tumeurs solides et des métastases expérimentales chez l’animal. L’inhibition de l’expression de la lactoferrine et l’absence du transcrit de la d -lactoferrine dans les lignées de cellules cancéreuses oestrogéno-dépendantes suggèrent que la d -lactoferrine pourrait avoir un effet direct sur le développement des cellules tumorales. Pour vérifier cette hypothèse, nous étudions : l’effet de la sur-expression de la d -lactoferrine dans une cellule qui a perdu la propriété de la synthétiser ; la répartition des transcrits de la lactoferrine de sécrétion et de la d -lactoferrine dans les cellules leucocytaires et épithéliales de la glande mammaire provenant de tissus sains ou pathologiques. Dans le cas des hémopathies malignes, nos travaux pourraient permettre le suivi de la régression des leucémies myéloïdes. Dans le cas du cancer du sein, ils pourraient permettre d’établir un pronostic précoce, l’absence du transcrit de la d -lactoferrine pouvant être associée à un stade d’agressivité tumorale.

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I - Equipe D.STEHELIN

STEHELIN Dominique DRCE CNRS

DUMONT Patrick IE2 CNRS

AUMERCIER Marc CR1 CNRS

STEHELIN Dominique DRCE CNRS

SPRUYT Nathalie IE CNRS

BAILLAT David BDI CNRS

STEHELIN Dominique DRCE CNRS

MONTE Didier CR1 CNRS

KHERROUCHE Zoulika Gpe 6bis Chargé d’Etudes 1 Inst. Pasteur Lille

STEHELIN Dominique DRCE CNRS

DUPRESSOIR Thierry IE CNRS

FERREIRA Elisabeth AI CNRS

LECHARDEUR Delphine ARC

BELOUZARD Sandrine

REGNIER Daniel CR1 INSERM

STEHELIN Dominique DRCE CNRS

DUTERQUE-COQUILLAUD Martine CR1 CNRS

FLOURENS Anne TR INSERM (50 %)

TOMAVO Nathalie Gpe5 Techn.Labor. 3 Inst. Pasteur Lille

BLUTEAU Gilles ARC

VERGER Alexis En thèse MESR

VLAEMINCK Virginie En thèse Internat de Médecine

BERTAUX Lionel

LEPRINCE Dominique DR2 CNRS

GUERARDEL Cateline Gpe5 Techn. Labor. 3 Inst. Pasteur Lille

DELTOUR Sophie En thèse Ligue

PINTE Sébastien

BAERT Jean-Luc CR1 CNRS

De LAUNOIT Yvan Professeur ULB

CHOTTEAU Anne Maître de Conférence Lille I

DAMOUR Isabelle Gpe5 Techn. Labor. Inst. Pasteur Lille

BEAUDOIN Claude Cons.Rech.Méd.Canada

BOCQUET Béatrice Amis de la Science

NETZER Sonia En thèse MESR

DUBUISSON Jean DR2 CNRS

WYCHOWSKI Czeslaw CR1 CNRS

PILLEZ André TR CNRS

UNG Sophana Gpe4 Techn. Labor. 2 Inst. Pasteur Lille

LAMBOT Michel ARC

OP DE BEECK Anne ARC

COCQUEREL Laurence En thèse MESR

ROUSSEL Juliette En thèse CHU Amiens

BONTE Dorine

ITA

BEGUE Agnès IE2 CNRS

B0UCHEZ Marie-Christine T CNRS

CREPE Fernande AGT INSERM

DEVASSINE Nicole SAR INSERM

FLOURENS Anne TR INSERM (50 %)

LAGROU Christian IE INSERM

PATTIN Michèle ADJT INSERM

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INSERM U-524 et Laboratoire de Pharmacologie Antitumorale du Centre Oscar Lambret,

Institut de Recherches sur le Cancer, Place de Verdun, 59045 Lille Cedex

Tél. 03 20 16 92 20 ; Fax. 03 20 16 92 29 ; E-mail : bailly@lille.inserm.fr

Le laboratoire présente une double appartenance. D'une part, l'équipe fait partie intégrante de l'Unité 524 INSERM dirigée par le Dr Jean-Pierre Kerckaert. D'autre part, il constitue l'Unité de Pharmacologie du Centre Oscar Lambret, dirigé par le Pr Jacques Bonneterre

Dr Christian Bailly, chercheur (DR2 INSERM);Dr Amélie Lansiaux, médecin (COL); Nicole Wattez, Cadre de laboratoire (COL); Brigitte Baldeyrou, Laborantine principale (COL); Christine Mahieu, Technicienne supérieure (COL); Martie-Paule Hildebrandt, technicienne (IRCL); Laurent Dassonneville, étudiant en thèse (ARC); Michael Facompré, étudiant en thèse (MERS); Valérie Gerniou, DEA chimie organique (ENSCL); William Laine, étudiant de l'ICPL; Aurélie Watelet, étudiante de l'ICPL; Christelle Tardy, étudiante de l'ICPL

Le thème des différents programmes de recherche développés dans notre laboratoire porte sur la meilleure connaissance des phénomènes de reconnaissance moléculaire entre des petites molécules anticancéreuses et les acides nucléiques, ainsi que leurs conséquences biologiques. Les résultats obtenus par des techniques complémentaires de chimie, spectroscopie et biologie moléculaire, ont fourni des informations essentielles pour le développement rationnel de nouveaux agents antitumoraux.

Les recherches ont pour objectif la découverte et la conception de nouveaux ligands de l'ADN capables de se fixer spécifiquement à certaines séquences d'ADN afin d'améliorer leur potentiel thérapeutique. Les composés étudiés sont principalement des agents intercalants ainsi que des ligands du petit sillon de l'ADN.

Nous étudions les interactions entre divers ligands et des fragments d'ADN, obtenus par PCR, contenant ou non des bases modifiées. Cette approche permet d'établir les bases de la reconnaissance moléculaire et d'analyser les conséquences.

Des molécules de type salène capables de complexer différents métaux (Cu, Fe, Ni, Mn ou Co) sont élaborées et étudiées. Une nouvelle série de nucléases artificielles auto-activées a été découverte.

Les ARN TAR et RRE du virus HIV-1 représentent des cibles potentielles pour le développement de nouveaux agents antiviraux. Les recherches permettent une meilleure compréhension de la reconnaissance entre ces ARN et différentes séries de petites molécules, qu'elles soient naturelles ou synthétiques.

Récemment, un programme de recherche en biologie cellulaire destiné à élucider les phénomènes de mort cellulaire programmée (apoptose), induite par les agents antitumoraux a été initié. Les études portent essentiellement sur les inhibiteurs de topoisomérases, à partir de différentes lignées cellulaire (sensibles ou chimio-résistantes) et par de nombreuses techniques explorant les différentes phases de l'apoptose.

De nombreux agents antitumoraux sont capables d'inhiber la relaxation et la coupure de l'ADN induites par la topoisomérase II. Ces mécanismes sont étudiés sur le plan moléculaire et cellulaire. Les travaux concernent par exemple, divers alkaloïdes antitumoraux isolés de plantes africaines ainsi que de nombreux composés synthétiques.

Les dérivés indolocarbazoles, analogues de la rebeccamycine (antibiotique antitumoral) sont des inhibiteurs de la topoisomérase I. Le rôle de la fraction glycosidique contribuant à l'activité inhibitrice et l'activité antitumorale est un sujet de recherche du laboratoire. Les propriétés d'interaction entre de nombreux analogues synthétiques de la rebeccamycine et l'ADN ou les complexes ADN-topoisomérase I sont étudiées.

L’adaptation de posologie en chimiothérapie anticancéreuse est un ajustement des doses de médicaments anticancéreux administrés en fonction de chaque patient. Le but est de donner le médicament à la dose la plus adaptée n’entraînant pas de toxicité pour atteindre l'effet thérapeutique maximal. L’adaptation de posologie est proposée aux patients (suivis au COL) porteurs d’un cancer des voies aérodigestives ou de l'oesophage mais également aux patients présentant des facteurs de risque de toxicité, ou d’autres pathologies.

- Bailly C., Carrasco C., Hamy F., Prudhomme M., Saleem A., Rubin E. The camptothecin-resistant topoisomerase I mutant F361S is cross-resistant to antitumor rebeccamycin derivatives. Biochemistry 1999, 38, 8605-8611.

- Bailly C., Qu X., Graves D.E., Prudhomme M., Chaires J.B. Molecular basis of DNA recognition and topoisomerase I inhibition by rebeccamycin analogues. Stereospecificity of the carbohydrate residue. Chemistry & Biology, 1999, 6, 277-286.

- Labourier E., Riou J.F., Prudhomme M., Carrasco C., Bailly C, Tazi J. Poisoning of topoisomerase I by an antitumor indolocarbazole drug: stabilization of topoisomerase I-DNA covalent complexes and specific inhibition of the protein kinase activity. Cancer Res., 1999, 59, 52-55.

- Bailly C., Dassonneville L., Colson P., Houssier C., Fukasawa K., Nishimura S., Yoshinari T. Intercalation into DNA is not required for inhibition of topoisomerase I by indolocarbazole antitumor agents. Cancer Res. 1999, 59, 2853-2860.

- Bailly C., Crow S., Minnock A., Waring M.J. Demethylation of thymines affects DNA cleavage by endonucleases but not sequence recognition by drugs. J. Mol. Biol. 1999, 291, 561-573.

- Bailly C., Lansiaux A., Dassonneville L., Demarquay D., Lavergne O., Bigg D.C.H. Homocamptothecin, an E-ring modified camptothecin analog, generates new topoisomerase I-mediated DNA breaks. Biochemistry 1999, 38, 15556-15563.

- Wang L., Bailly C., Kumar A., Ding D., Boykin D.W., Wilson W.D. Specific molecular recognition of mixed nucleic acid sequences: An aromatic dication that binds in the DNA minor groove as a dimer. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000, 97, 12-16.

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Tél : 03 20 87 12 34 ; Fax : 03 20 87 12 33 ; Email : Jean.Coll@ibl.fr

Les interactions entre EBV et les lymphocytes B sont maintenant bien caractérisées notamment l’activation cellulaire polyclonale consécutive à une infection par EBV in vitro ou in vivo. Par contre, l’interaction entre EBV et d’autres cellules cibles comme les lymphocytes T ou les monocytes reste encore mystérieuse.

La preuve concrète de la transformation des lymphocytes T et de monocytes d’individus immuno-compétents a été apportée par une étude réalisée dans notre laboratoire. Dans le cadre d’une immortalisation de cellules périphériques par EBV des lignées T et monocytaires ont été obtenues. Ces cellules contiennent le génome viral, expriment les protéines latentes EBNA-1 et LMP-1 et entraînent la formation de tumeurs solides après leur injection à des souris immunodéficientes RAG-2 et Nude.

Notre but est d’analyser les différents critères moléculaires de transformation et d'activation cellulaire de ces cellules en fonction de l’expression du virus et en particulier de la protéine oncogène LMP-1. En effet, tout un faisceau de données de la littérature tente à déterminer que LMP-1 est le gène viral critique pour la transformation. Afin d'évaluer directement sa capacité oncogénique vis à vis des cellules T et des macrophages, nous sommes en train de développer des vecteurs recombinants à expression inductible exprimant des versions sauvage ou mutées de ce gène. Ces constructions seront utilisées dans une étude d’effets transformants directs de LMP1 sur certaines lignées (protection contre l’apoptose par exemple). En outre, nous envisageons l’expression de versions mutées de LMP1 dans les cellules transformées par EBV pour étudier l’effet de la perturbation de la fonction de la protéine normale résidente (effet dominant négatif) sur la signalisation cellulaire et sur les critères de transformation déployés par ces cellules.